Serologiset reaktiot: lajit, käyttö

Lähes kaikkien tarttuvien tautien laboratoriodiagnostiikka perustuu potilaiden veressä olevien vasta-aineiden osoittamiseen, jotka on kehitetty patogeenin antigeeneille serologisten reaktioiden avulla. He astuivat lääketieteelliseen käytäntöön 1800-luvun lopulta.

Tieteen kehitys auttoi määrittämään mikrobien antigeenisen rakenteen ja niiden toksiinien kemialliset kaavat. Tämä mahdollistaa terapeuttisten, mutta myös diagnostisten seerumien luomisen. Ne saadaan aikaan tuomalla heikentyneet taudinaiheuttajat laboratorioeläimiin. Useiden päivien altistuksen jälkeen kanien tai hiirien verestä valmistetaan mikrobeja tai niiden toksiinien tunnistamiseen käytettyjä valmisteita käyttämällä serologisia reaktioita.

Tällaisen reaktion ulkoinen ilmeneminen riippuu sen formulaation olosuhteista ja potilaan veren antigeenien tilasta. Jos mikrobien hiukkaset ovat liukenemattomia, ne saostuvat, lysoivat, sitoutuvat tai immobilisoivat seerumissa. Jos antigeenit ovat liukoisia, esiintyy neutraalisuuden tai saostumisen ilmiö.

Agglutinaatioreaktio (PA)

Serologinen reaktion agglutinaatio on erittäin spesifinen. Se on yksinkertainen toteutus ja on riittävän selkeä nopeasti määritettäessä antigeenien läsnäoloa potilaan seerumissa. Sitä käytetään Vidalin reaktioon (diagnoosi typo- ja paratifysi) ja Weigl (tifo).

Se perustuu ihmisen vasta-aineiden (tai agglutiniinien) ja mikrobisolujen (agglutinogeenit) väliseen spesifiseen vuorovaikutukseen. Niiden vuorovaikutuksen jälkeen muodostuu hiukkasia, jotka saostuvat. Tämä on myönteinen merkki. Reaktion muotoilemiseen voidaan käyttää eläviä tai tapettuja mikrobisia aineita, sieniä, alkueläimiä, verisoluja ja somaattisia soluja.

Kemiallisesti reaktio on jaettu kahteen vaiheeseen:

1. Spesifinen vasta-aineiden yhdiste (AT) antigeeneillä (AH).
2. Epäspesifinen - AG-AT: n konglomeraattien saostuminen eli agglutinaatin muodostuminen.

Epäsuoran agglutinaation (RPHA)

Tämä reaktio on herkempi kuin edellinen. Sitä käytetään diagnosoimaan bakteerien, solunsisäisten loisten ja alkueläinten aiheuttamia sairauksia. Se on niin tarkka, että se pystyy havaitsemaan hyvin alhaisen vasta-ainepitoisuuden.

Sen tuottamiseksi käytämme ihmisen puhdistettuja karitsan erytrosyyttejä ja punasoluja, jotka on esikäsitelty vasta-aineilla tai antigeeneillä (tämä riippuu siitä, mitä laboratorion teknikko haluaa löytää). Joissakin tapauksissa ihmisen erytrosyyttejä hoidetaan immunoglobuliineilla. Erytrosyyttien serologiset reaktiot katsotaan tapahtuneen, jos ne on kerrostettu koeputken pohjalle. Positiivinen reaktio voidaan sanoa, kun solut on järjestetty käännetyn sateenvarjon muodossa, joka koko alaa. Negatiivinen reaktio lasketaan, jos punasolut ovat asettuneet pylvääseen tai pohjassa olevan napin muotoon.

Saostusreaktio (RP)

Tämän tyyppiset serologiset reaktiot auttavat havaitsemaan äärimmäisen pieniä antigeenihiukkasia. Nämä voivat olla esimerkiksi proteiineja (tai niiden osia), proteiiniyhdisteitä lipidejä tai hiilihydraatteja, bakteerien osia ja niiden toksiineja.

Seraa reaktion suorittamiseksi saadaan eläimistä, tavallisesti kanit, keinotekoisesti tarttumalla. Tämä menetelmä voi vastaanottaa kokonaan minkä tahansa saostusseerumin. Serologisten saostusreaktioiden stabiilisuus on samanlainen kuin agglutinaatioreaktion vaikutusmekanismi. Seerumiin sisältyvät vasta-aineet yhdistyvät antigeenien kanssa kolloidisessa liuoksessa muodostaen suuria proteiinimolekyylejä, jotka on sijoitettu putken pohjalle tai substraattiin (geeliin). Tätä menetelmää pidetään erittäin spesifisenä ja voi havaita jopa vähäpätöisiä määriä ainetta.

Käytetään diagnosoimaan rutto, tularemia, pernarutto, aivokalvontulehdus ja muut sairaudet. Lisäksi hän osallistuu rikostekniseen lääkärintarkastukseen.

Geelin saostusreaktio

Serologiset reaktiot voidaan suorittaa paitsi nestemäisessä väliaineessa myös agargeelissä. Tätä kutsutaan hajakuormitukseksi. Sen avulla tutkitaan monimutkaisten antigeeniseosten koostumusta. Tämä menetelmä perustuu vasta-aineiden antigeenien kemotaksisuuteen ja päinvastoin. Geelissä ne liikkuvat toisiaan kohti eri nopeuksilla ja kokoontuvat muodostaen sateen linjat. Kukin rivi on yksi AG-AT: n sarja.

Eksotoksiinin neutraloinnin reaktio antitoxiinilla (PH)

Antitoxiset seerumit pystyvät neutraloimaan eksotoksiinin vaikutusta, joka tuottaa mikro-organismeja. Tämä on perustana näille serologisille reaktioille. Mikrobiologia käyttää tätä menetelmää seerumien, toksiinien ja toksoidien titraukseen sekä niiden terapeuttisen aktiivisuuden määrittämiseen. Toksiinin neutralointi määritetään tavanomaisilla yksiköillä - AE.

Lisäksi tämän reaktion ansiosta on mahdollista määrittää eksotoksiinin spesifinen tai tyypillinen lisävaruste. Tätä käytetään tetanuksen, kurkkumätä, botulismin diagnoosiin. Tutkimus voidaan tehdä sekä "lasiin" että geeliin.

Lyysireaktio (RL)

Immuuniseerumi, joka tulee potilaan kehoon, on lisäksi sen passiivisen immuniteetin lisäksi myös lyysisyytensä. Se pystyy liuottamaan mikrobisia aineita, solujen ulkoisia elementtejä ja viruksia, jotka tulevat potilaan kehoon. Riippuen seerumin vasta-aineiden spesifisyydestä, bakteriolysiinit, sytolysiinit, spirohetholysines, hemolysins ja muut eristetään.

Näitä spesifisiä vasta-aineita kutsutaan "komplementiksi". Se on lähes kaikissa kehon nesteissä, sillä on monimutkainen proteiinin rakenne ja on erittäin herkkä kuumille, ravistelemalle, hapolle ja suoralle auringonvalolle. Mutta kuivassa tilassa se kykenee ylläpitämään lyysisyytensä jopa kuuden kuukauden ajan.

Tyyppisiä tämän tyyppisiä serologisia reaktioita ovat:

- bakteriolyysi;

- hemolyysi.

Bakteerilyysi suoritetaan käyttäen potilaan veriseerumia ja spesifistä immuuniseerumia elävien mikrobien kanssa. Jos veressä on riittävä määrä komplementtia, tutkija näkyy bakteerilysissä, ja reaktiota pidetään positiivisena.

Toinen veren serologinen vaste on se, että potilaan erytrosyyttisuspensiota hoidetaan seerumista, joka sisältää hemolysiinejä, jotka aktivoidaan vain tietyn kohtalon ollessa läsnä. Jos on olemassa yksi, laboratorion assistentti havaitsee punasolujen liukenemisen. Tätä reaktiota käytetään laajalti nykyaikaisessa lääketieteessä komplementtititterin (eli sen pienimmän määrän, joka saa aikaan punasolujen hajotuksen) määrittämisen seerumissa ja komplementtien sitoutumisen analysoimiseksi. Näin tehdään serologinen vaste kuhaille - Wasserman-reaktio.

Komplementin kiinnitysreaktio (RCC)

Tätä reaktiota käytetään potilaan veriseerumissa havaitsemaan infektiivisen aineen vasta-aine ja tunnistamaan patogeeni sen antigeenisestä rakenteesta.

Tähän asti olemme kuvanneet yksinkertaisia serologisia reaktioita. RSK: ta pidetään monimutkaisena reaktioksi, koska se vuorovaikuttaa ei kahden, mutta kolmen elementin kanssa: vasta-aine, antigeeni ja komplementti. Sen ydin on se, että vasta-aineen ja antigeenin välinen vuorovaikutus tapahtuu vain komplementtiproteiinien läsnä ollessa, jotka adsorboidaan muodostuneen AG-AT-kompleksin pinnalle.

Antigeenit itsessään täydentäen komplementin jälkeen ovat merkittäviä muutoksia, jotka ilmaisevat reaktion laadun. Se voi olla lyysi, hemolyysi, immobilisaatio, bakterisidinen tai bakteriostaattinen vaikutus.

Itse reaktio tapahtuu kahdessa vaiheessa:

1. Antigeeni-vasta-ainekompleksin muodostuminen, joka on visuaalisesti näkymättömiä tutkijalle.
2. Antigeeni muuttuu komplementin vaikutuksen alaisena. Tämä vaihe voidaan usein jäljittää paljain silmin. Jos visuaalinen vastaus ei ole näkyvissä, käytetään lisäindikaattorijärjestelmää havaitsemaan muutokset.

Indikaattorijärjestelmä

Tämä reaktio perustuu sitovaan komplementtiin. Koeputkessa tunnin kuluttua DSC-formulaatiosta lisätään ramian puhdistettuja erytrosyyttejä ja ei-täydennettyä hemolyyttistä seerumia. Jos putkessa oli sitomaton komplementti, se liittyisi AG-AT-kompleksin, joka muodostui vasikan lampaan solujen ja hemolysiinin välillä ja aiheuttaa niiden liukenemisen. Tämä tarkoittaa sitä, että RCC on negatiivinen. Jos punasolut pysyvät ehjinä, vastaavasti, reaktio on positiivinen.

Hemagglutinaatioreaktio (RGA)

Kaksi täysin erilaista hemagglutinaatioreaktiota on kaksi. Yksi niistä on serologinen, sitä käytetään veriryhmien määrittämiseen. Tässä tapauksessa erytrosyytit ovat vuorovaikutuksessa vasta-aineiden kanssa.

Ja toinen reaktio ei viittaa serologisiin, koska punasolut reagoivat virusten tuottamien hemagglutiniinien kanssa. Koska jokainen aine toimii vain erityisillä erytrosyytteillä (kana, lammas, apina), tätä reaktiota voidaan pitää kapeasti spesifisenä.

Ymmärrä, positiivinen reaktio tai negatiivinen, voit sijoittaa verisolujen sijainti pohjaan testiputken. Jos niiden kuva muistuttaa käänteistä sateenvarjoa, niin haluttu virus on läsnä potilaan veressä. Ja jos kaikki punasolut muodostavat kolikkopatsaan, niin ei ole tuntemattomia patogeenejä.

Hemagglutinaation eston reaktio (RTGA)

Tämä on erittäin spesifinen reaktio, jonka avulla voit määrittää tyypin, viruksen tyypin tai spesifisten vasta-aineiden läsnäolon potilaan verisolussa.

Sen ydin on se, että testiputkeen lisätyt vasta-aineet testimateriaalin kanssa estävät antigeenien kertymisen punasoluihin pysäyttämällä hemagglutinaation. Tämä on kvalitatiivinen indikaatio spesifisten antigeenien veressä olevan läsnäolosta tietylle halutulle virukselle.

Immunofluoresenssin (RIF)

Reaktio perustuu kykyyn havaita AG-AT-komplekseja luminesenssimikroskopiassa niiden käsittelyn jälkeen fluorokromiväreillä. Tämä menetelmä on helppo käsitellä, ei vaadi puhtaan kulttuurin jakamista ja vie vähän aikaa. Se on välttämätöntä tarttuvien tautien nopealle diagnosoinnille.

Käytännössä nämä serologiset reaktiot jakautuvat kahteen tyyppiin: suora ja epäsuora.

Suora RIF tuotetaan antigeenillä, jota esikäsitellään fluoresoivalla seerumilla. Ja epäsuorasti lääke ensin käsitellään tavanomaisella diagnoosilla, joka sisältää antigeenejä haluttuihin vasta-aineisiin, ja sitten AG-AT-kompleksin proteiineille spesifinen luminoiva seerumi uudelleenkäytetään ja mikrobiset solut havaittavissa mikroskopialla.